白癜风诊疗规范 https://m-mip.39.net/pf/mipso_6185617.html背景介绍
1.巨噬细胞
巨噬细胞起源于骨髓干细胞，可在巨噬细胞集落刺激因子（Macrophagecolony-stimulatingfactor，M-CSF）作用下转化为单核细胞，分布于血液循环，迁移到组织器官分化成为成熟的巨噬细胞。巨噬细胞可以吞噬外来微生物并递呈抗原，通过合成分泌多种细胞因子参与固有免疫、适应性免疫应答以及维持自身稳态等生理过程，在调控宿主炎症反应变化的过程中扮演重要作用。
2.巨噬细胞极化与炎症性肠病的关系
巨噬细胞具有异质性和多样性，不同微环境中的成分可致其分化为具有多种表型的巨噬细胞，主要包括经典活化的Ｍ1型和选择性活化的Ｍ2型巨噬细胞。Ｍ1型巨噬细胞可以促进Th1型免疫应答，在炎症初期促进炎症反应的发生，对侵入细胞的病原体有杀伤作用，而M2型巨噬细胞的功能主要是促进Th2型免疫应答，参与组织重构、促进机体的抗炎反应、纤维化及肿瘤发生发展等病理过程。炎症性肠病是一种自身免疫疾病，肠道内M1/M2巨噬细胞平衡被打破，多见M1巨噬细胞数量的增加、M2巨噬细胞数量的减少，最终造成肠道黏膜炎症免疫环境改变。因此，诱导巨噬细胞向M2亚型进行转变，可有效改善炎症。
年8月，澳门大学王瑞兵教授、香港中文大学叶德全教授团队在Theranostics杂志发表题为“Ameliorationofulcerativecolitisviainflammatoryregulationbymacrophage-biomimeticnanomedicine”的研究论文，开发了一种巨噬细胞仿生纳米药物通过调节炎症微环境实现溃疡性结肠炎的靶向治疗。
研究思路
溃疡性结肠炎是一种炎症性肠病，具有反复发作和肿瘤转变倾向的特征，为改善现有溃疡性结肠炎治疗药物的靶向性、特异性释放和炎症调控不理想等问题，作者进行了以下设计：
①模型药物：罗格列酮作为一种PPARγ的激动剂，在体内可诱导巨噬细胞极化为M2亚型，改善炎症免疫微环境而发挥治疗作用。
②ROS响应释药：4-苯基硼酸频那醇酯（PBAP）为ROS响应的化合物，与β-环糊精衍生物(β-CD)结构中的活性羟基反应得到Ox-CD，在炎症部位高浓度ROS作用下，苯硼酸酯发生氧化反应，释放出药物。
③炎症靶向：采用巨噬细胞膜包裹纳米粒，基于天然归巢作用实现炎症靶向；同时巨噬细胞膜可吞噬或抑制相关促炎因子，从而缓解炎症发生发展。
④协同调控炎症微环境：药物与Ox-CD、DSPE-PEG、卵磷脂在水中自组装形成纳米粒（RN），采用巨噬细胞膜进一步包覆(RMN)，引导纳米粒富集于炎症部位，并实现ROS响应释药，罗格列酮诱导M2型巨噬细胞、巨噬细胞膜抑制促炎因子的表达，协同调控炎症微环境而发挥治疗作用。
研究设计示意图
研究结果
1.RMN的制备和表征
作者采用动态光散射仪测定NPs粒径和zeta电位，通过透射电镜观察表面形态，以SDS-PAGE考察巨噬细胞膜（MEM）与RMN表面蛋白电泳行为，结果如下：
①RMN粒径为.2nm，相较RN粒径增加约22nm，RMN与MEM的zeta电位相近，且将RMN放入4℃水中7天，其粒径和zeta电位变化差异无统计学意义，说明纳米粒稳定性良好。
②经透射电镜观察RMN呈球状，并可清晰观察到表面包覆的巨噬细胞膜（MEM）。
③经SDS-PAGE图谱观察，MEM与RMN表面蛋白电泳行为相同，表明Ox-CDNPs被巨噬细胞成功包膜。
④通过观察RMN在不同浓度（0，0.1，1mM）H2O2溶液中的释放曲线可知，药物释放速度与H2O2溶液的浓度呈正比，证实了其ROS响应释药机制。
2.RMN对体外巨噬细胞极化的影响
作者选择骨髓来源巨噬细胞（BMDM）为母细胞，以脂多糖（LPS）诱导其分化为M1型、IL-4诱导分化为M2型，分别和不同处方（RLZ,RN,MN,RMN）共同孵育。采用流式细胞术检测CD86(M1型巨噬细胞标记物)、CD(M2型巨噬细胞标记物)的荧光强度，采用qPCR检测相关细胞因子mRNA的表达。结果表明，RMN可最大程度降低CD86、增加CD水平，降低TNF-α,iNOS(与M1型巨噬细胞相关)、增加IL-1Rn，Fizz-1（与M2型巨噬细胞相关）mRNA的表达，说明RMN在体外可诱导巨噬细胞极化为M2型。
RMN对体外CD86\CD\相关细胞因子表达的影响
3.RMN炎症靶向性研究
作者采用荧光染料Cy7.5标记NPs、MNPs,在DSS诱导的结肠炎小鼠体内分别于相应时间点观察肝、心、脾、肺、肾和结肠中的荧光强度，以评价其炎症靶向性。结果表明，游离的荧光染料主要聚集在肝脏中，给药6小时后，MN、N组在结肠中的荧光强度分别为对照组的1.9，1.6倍，说明RMN可有效实现炎症靶向。
Cy7.5,Cy7.5-N和Cy7.5-MN在DSS诱导结肠炎小鼠中组织分布
4.RMN体内药效学研究
采用3%DSS溶液对雄性C57BL/6小鼠进行溃疡性结肠炎造模，分别于第0天、3天和5天给与不同处方的药物（生理盐水,RLZ,RN,MN,RMN），于第7天处死，记录体重变化、结肠长度、脾脏重量，计算疾病活动指数（DAI）和脾脏指数(SI)，评价其炎症治疗效果。结果表明，RMN治疗组小鼠体重几乎没有减轻，与其他治疗组相比，可最大程度降低DAI和SI，表现出最优的治疗效果。
不同制剂对小鼠体重、DAI和SI的影响
此外，作者采用免疫荧光组化法考察RMN在体内对巨噬细胞极化的影响，ELISA法检测血液和结肠组织中细胞因子的水平，并分别用HE、PAS染色进行组织病理形态观察。结果表明，RNM治疗组可分别降低CD86、提高CD的水平，有效降低血液和组织中的促炎细胞因子如TNF-α、IL-6、IL-1β的水平，提高抗炎细胞因子IL-10的表达，并能最大程度的减轻炎症的深度和面积，恢复结肠小窝结构和杯状细胞。综上所述，RMN可有效使炎症组织中的巨噬细胞向M2极化，恢复肠道组织形态，保护体内肠道黏膜。
不同制剂在体内对巨噬细胞极化以及结肠组织形态的影响
结论
本研究基于溃疡性结肠炎的病理特点，设计了巨噬细胞膜包覆的ROS响应释药的仿生纳米递药系统。由于巨噬细胞天然的炎症归巢效应，巨噬细胞膜可携带纳米药物靶向至炎症结肠组织，随后在局部高浓度ROS作用下释放罗格列酮，进而诱导巨噬细胞向M2型极化，同时巨噬细胞膜通过抑制促炎因子的表达，协同调节炎症微环境。此基于免疫治疗的新型仿生纳米递药系统为炎症治疗提供了新思路。
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